Лекция: Практическая часть

2.1 Решение задач.

2.2 Лабораторная работа.

2.3 Проведение контроля конечного уровня знаний.

Задачи

1 При прохождении электронов от сукцината черезДЦ к кислороду верными условиями являются:

а) отношение P/O = 2; б) участвует коэнзим Q; в) участвует цитохром Р450; г) участвует NADH-дегидрогеназа; д) отношение P/O = 1?

2 Что не принимает участия в транспорте электронов по митохондриальной ДЦ:

а) NADH; б) цитохром P450; в) негемовое железо; г) цитохром b; д) флавопротеид; е) цитохром b5?

3 При окислении 1 грамма какого из субстратов выделяется больше АТФ:

а) изоцитрата; б) аспартата; в) олеиновой кислота; г) фруктозы; д) гликогена; е) сукцината?

4 При окислительном фосфорилировании динитрофенол является:

а) ингибитором NAD+-потребляемых реакций;

б) ингибитором цитохромов;

в) ингибитором синтеза АТФ и дыхания;

г) разобщителем;

д) ингибитором SH-групп;

е) переносчиком протонов (протонофором)?

5 Какие из указанных фосфатных соединений имеют более отрицательное значение DG° при гидролизе, чем ГТФ:

а) Г-1-Ф; б) Г-6-Ф; в) 2,3-дифосфоглицерат; г) фосфоенолпируват; д) глицерол-1-фосфат?

6 Цитохромоксидаза содержит:

а) кобальт; б) цинк; в) магний; г) ванадий; д) медь; е) селен?

7 Цитохромоксидаза специфически ингибируется:

а) CO2; б) реагентом Шиффа; в) парахлормеркурийбензоатом (SH-реагент); г) цианидами; д) H2S; е) СО?

8 Фосфорилирование АДФ в АТФ возможно за счетсубстратов:

а) 3-ФГА; б) 1,3-диФГК; в) фруктозо-1,6-дифосфата; г) фосфоенолпирувата; д) ацетил-КоА; е) сукцинил-КоА?

9 Какие ферменты могут фосфорилировать АДФ:

а) цитратсинтетаза; б) СДГ; в) фумараза; г) a-кг-ДГ; д) протонная АТФ-аза; е) сукцинилтиокиназа?

Лабораторная работа. Количественное определение каталазы по Баху и Зубковой

Принцип метода. Основан на титриметрическом определенииколичества перекиси водорода, разложенной ферментомзаопределенный промежуток времени, по следующему уравнению:

2KMnO4 + 5H2O2 + 4H2SO4 ¾® 2KHSO4 + 2MnSO4 + 8H2O + 5O2.

О количестве расщепленной перекиси водорода судят по разности количества KMnO4, израсходованного на титрованиедоипосле действия каталазы.

Активность каталазы выражают с помощью каталазногочислаи показателя каталазы. Каталазным числом называют количество миллиграммов перекиси водорода, которое разлагается в 1 мкл крови.

Ход работы. Разведенную кровь (1: 1000) взбалтываютидобавляют по 1 мл в две колбы, приливают по 7млдистиллированной воды; в опытную пробу добавляют 2 мл 1 %-го раствора H2O2, а в контрольную – 5 мл 10 %-го раствора H2SO4. Действие каталазы в кислой среде (в контрольной пробе) прекращается, т. к. оптимум pH = 7,4.

Колбы оставляют при комнатной температуре на 30мин.Затем приливают в опытную колбу 5 мл 10 %-го H2SO4, а в контрольную– 2 мл 1 %-го H2O2. Содержимое каждой колбы титруют 0,1нраствором KMnO4 до появления бледно-розовой окраски.

Рассчитывают каталазное число (КЧ) по формуле

КЧ = (А – В) ´ 1,7,

где А – количество 0,1нраствора KMnO4, пошедшее на титрование контрольной пробы, где каталаза разрушена, мл;

В – количество 0,1н раствора KMnO4, пошедшее натитрование опытной пробы, мл.

На титрование контрольнойпробы, где каталаза разрушена, пойдет больше раствора KMnO4, чем натитрованиеопытнойпробы. Полученную разность умножают на 1,7(коэффициентпересчета) и получают каталазное число для исследуемой крови.

В норме каталазное число составляет 10–15 единиц.

Клинико-диагностическое значение. Определение активности каталазы крови имеет значение для диагностики рака, анемии, туберкулеза. При этих заболеванияхактивность каталазы в крови снижается.

Примечание ‑ Показателем каталазы служит дробь, в которой числителем является каталазное число, а знаменателем – число миллионов эритроцитов в 1 мкл исследуемой крови.

Выводы. Записать полученный результат и дать его клинико-диагности­ческую оценку.

Рекомендуемая литература

Основная

1 Материал лекций.

2 Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 213–220; 1998. С. 305–317.

3 Николаев А. Я. Биологическая химия. М.: Высшая школа, 1989. С. 199–221.

Дополнительная

4 Филиппович Ю. Б. Основы биохимии. М.: Высшая школа, 1993. С. 403–438.

5 Марри Р. и др. Биохимия человека. М.: Мир, 1993. Т. 1. С. 111–139.

6 Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. Т. 2. С. 403–438, 508–550.

7 АлбертсБ.идр.,Молекулярнаябиология клетки. М.: Мир, 1994.Т. 1. С. 430–459.

8 Скулачев В.П. Энергетика биологическихмембран. М.: Наука. 1989.