Лекция: Методы обнаружения барбитуратов химическими методами
Для обнаружения барбитуратов применяются цветные реакции, реакции осаждения, микрокристаллоскопические реакции, методы хроматографии. УФ- и ИК-спектроскопии и др.
Предварительная проба. Для обнаружения барбитуратов в моче применяют предварительную пробу, основанную на реакции этих веществ с ацетатом кобальта и гидроксидом калия.
В делительную воронку вносят 50 мл мочи, к которой по каплям прибавляют 10 % раствор серной кислоты до рН ≈ 4… 5 и 50 мл диэтилового эфира. Содержимое делительной воронки взбалтывают. После разделения фаз отделяют эфирную вытяжку. Водную фазу еще раз взбалтывают с 50 мл диэтилового эфира
Эфирные вытяжки соединяют и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл хлороформа. К хлороформному раствору прибавляют 2 капли свежеприготовленного 1% раствора ацетата кобальта в метиловом спирте и несколько капель свежеприготовленного 1%-го раствора гидроксида лития в метиловом спирте. После прибавления каждой капли указанных реактивов жидкость взбалтывают. Появление голубой окраски указывает на наличие барбитуратов в моче.
Кислотная форма барбитуратов со многими реактивами образует кристаллический осадок, возможно по типу двойных солей или ионных ассоциатов.
Реакция барбитуратов с изопропиламином и солями кобальта. Для обнаружения барбитуратов Парри (1924 г.) предложил реакцию, основанную на взаимодействии этих веществ с солями кобальта и аммиаком. Позднее другие исследователи аммиак заменили изопропиламином. При взаимодействии барбитуратов с изопропиламином и солями кобальта образуются внутрикомплексные соединения:
Выполнение реакции. К 2 мл хлороформного раствора исследуемого вещества прибавляют 0,3 мл 1 % раствора ацетата кобальта в безводном этиловом спирте и 1 мл 5% раствора изопропиламина в этиловом спирте. При наличии барбитуратов появляется фиолетовое окрашивание. Вместо этилового спирта можно использовать метиловый спирт.
Реакция с солями кобальта и щелочами. Цвиккер (1931) установил, что от прибавления растворов хлорида кобальта и гидроксида бария к барбитуратам образуется окрашенное соединение. В 1932 г. Цвиккер вместо раствора гидроксида бария использовал раствор гидроксида калия.
Выполнение реакции. Исследуемое вещество или остаток, полученный после выпаривания вытяжек из соответствующих объектов, растворяют в 0,2-0,5 мл абсолютного этилового спирта. К этому раствору прибавляют 1-2 капли 1% раствора ацетата кобальта в абсолютном этиловом спирте и 1-2 капли 1% раствора гидроксида калия в абсолютном этиловом спирте. При наличии барбитуратов появляется розовая или красная окраска. Окрашенное соединение разлагается в присутствии воды, поэтому при выполнении указанной реакции используются реактивы, растворенные в абсолютном этиловом или в метиловом спирте. Оттенок и интенсивность окраски зависят от применяемого спирта, «это объясняется различной сольватирующей способностью образованных этими спиртами соединений. Указанную, реакцию дают некоторые гидантоины. сулфаниламидные препараты, пурины, пиридины и др.
Реакция с пиридином и солями меди. При взаимодействии барбитуратов с пиридином и солями меди образуютсятрудно растворимые комплексные соединения. Под влиянием пиридина происходят енолизация и частичная ионизация барбитуратов. Пиридин с ионами меди образует положительно заряженный комплексный ион [Сu(Ру)]2+.
При взаимодействии комплекса пиридииа с ионами меди и ионизированными молекулами барбитуратов образуется внутрикомплексное соединение.
Минеральные кислоты разлагают это соединение.
Осадок, образующийся при взаимодействии барбитуратов с солями меди и пиридином, может быть аморфным и кристаллическим.
Выполнение реакции. На предметное стекло наносят несколько капель раствора исследуемого вещества в хлороформе и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 2 капли 10%-го раствора аммиака и 1-2 капли реактива (раствор сульфата меди в аммиаке и пиридине). При наличии барбитуратов через 10-15 мин появляются кристаллические или аморфные осадки.
Мурексидная реакция. Для обнаружения барбитуратов предложено несколько вариантов мурексидной реакции. Один из вариантов этой реакции приводится ниже.
К сухому остатку в фарфоровой чашке, полученному после выпаривания вытяжек из биологического материала, или к небольшому количеству сухого вещества прибавляют 3 капли 3%-го раствора пероксида водорода и 3 капли реактива, содержащего соль Мора и хлорид аммония. Содержимое чашки выпаривают, сухой остаток нагревают до появления белых паров. После охлаждения прибавляют 3 капли 6 М раствора аммиака
Реакция с хлорцинкйодом. На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю раствора хлорцинкйода. Через 10-15 мин под микроскопом наблюдают форму образовавшихся кристаллов. При наличии барбитуратов (барбамил, барбитал, бутобарбитал, этаминал) в исследуемом растворе появляются кристаллические осадки.