Реферат: Энергетические вещества тканей почки

--PAGE_BREAK--
1.3. Тканевая особенность включения энергетических веществ в биоэнергетику
Сложные физиологические процессы в почечной ткани протекают с постоянным потреблением большого количества энергии, выделяемой при метаболических реакциях. Не менее 8-10% всего поглощаемого в покое кислорода используется на окислительные процессы в почках. Потребление энергии на единицу массы в почках больше, чем в любом другом органе.

В корковом веществе почки ярко выражен аэробный тип обмена веществ. В мозговом веществе преобладают анаэробные процессы. Почка относится к органам, наиболее богатым ферментами. Большинство этих ферментов встречается и в других органах. Так, ЛДГ, АсАТ, АлАТ, глутаматдегидрогеназа широко представлены как в почках, так и в других тканях. Вместе с тем имеются ферменты, которые в значительной степени специфичны для почечной ткани. К таким ферментам прежде всего относится глицин-амидинотроансфераза (трансамидиназа). Данный фермент содержится в тканях почек и поджелудочной железы и практически отсутствует в других тканях. Глицин-амидинотрансфераза осуществляет перенос амидиновой группы с L-аргинина на глицин с образованием L-орнитина и гликоциамина:

<img width=«51» height=«13» src=«ref-1_179496206-269.coolpic» v:shapes="_x0000_s1031">L-аргинин + Глицин               L-орнитин + Гликоциамин.

Эта реакция является начальным этапом синтеза креатина. Глицин‑амидинотрансфераза была открыта еще в 1941 г., но только в 1965 г. У. Хорнер и соавт., а затем С.Р. Мардашев и А.А. Карелин (1967) впервые отметили диагностическую ценность определения фермента в сыворотке крови при заболевании почек. Появление данного фермента в крови может быть связано либо с поражением почек, либо с начинающимся или развившимся некрозом поджелудочной железы.

Наивысшая активность глицин-амидинотрансферазы в сыворотке крови наблюдается при хроническом пиелонефрите в фазе нарушения азотовыделительной функции почек, а далее в убывающем порядке следуют хронический нефрит с гипертензионным и отечно-гипертензионным синдромами и умеренным нарушением азотовыделительной способности, хронический нефрит с изолированным мочевым синдромом без нарушения азотовыделительной функции, остаточные явления острого диффузного гломерулонефрита.

Ткань почек относится к типу тканей с высокой активностью изоферментов ЛДГ1 и ЛДГ2. При изучении тканевых гомогенатов различных слоев почек обнаруживается четкая дифференциация изоферментных спектров ЛДГ. В корковом веществе преобладает активность ЛДГ1 и ЛДГ2, а в мозговом ‑ ЛДГ5 и ЛДГ4. При острой почечной недостаточности в сыворотке крови повышается активность анодных изоферментов ЛДГ, т. е. изоферментов  с высокой электрофоретической подвижностью (ЛДГ1 и ЛДГ2) .

Определённый интерес представляет также исследование изоферментов аланинаминопептидазы (ААП). Известны 5 изоферментов ААП. В отличие от изоферментов ЛГД изоферменты ААП определяются в различных органах не в виде полного спектра (5 изоферментов), а чаще как один изофермент. Так, изофермент ААП1представлен главным образом в ткани печени, ААП2 – в поджелудочной железе, ААП3 – в почках, ААП4 и ААП5 – в различных отделах стенки кишки. При повреждении ткани почек изофермент ААП3 обнаруживается в крови и моче, что является специфическим признаком поражения почечной ткани.

Через фильтрующую мембрану клубочка практически не проходят альбумины и глобулины, но свободно фильтруются пептиды. Тем самым в канальцы непрестанно поступают гормоны, изменённые белки. Их расщепление имеет двоякое физиологическое значение – организм освобождается от физиологически активных веществ, что улучшает точность регуляции, а в кровь возвращаются аминокислоты, используемые для последующих синтезов. Имеющиеся данные указывают на возможность извлечения некоторых белков и полипептидов клетками нефрона из околоканальцевой жидкости и их последующего разрушения.

Таким образом, почка играет важную роль в расщеплении низкомолекулярных и изменённых (в том числе денатурированных) белков. Это объясняет значение почки в восстановлении фонда аминокислот для клеток органов и тканей, в быстром устранении из крови физиологически активных веществ и сохранении для организма их компонентов.

Почка не только потребляет глюкозу в процессе обмена, но и обладает способностью к значительной её продукции. В обычных условиях скорости двух последних процессов равны. Использование глюкозы для выработки энергии в почке составляет около 13% общего потребления кислорода почкой. Глюконеогенез происходит в коре почки, а наибольшая активность гликолиза характерна для мозгового вещества почки.

Почка обладает весьма активной системой образования глюкозы, её интенсивность на 1 г массы почки больше, чем в печени. При длительном голодании в почках образуется половина общего количества глюкозы, поступающей в кровь. Для этого используются органические кислоты, которые превращаются в глюкозу, являющуюся нейтральным веществом, что способствует одновременно регуляции pH крови. При алкалозе, напротив, снижен уровень глюконеогенеза из кислых субстратов. Зависимость скорости и характера глюконеогенеза от велечины pH является особенностью углеводного обмена почки по сравнению с печенью.

Превращение различных субстратов в глюкозу, поступающую в общий кровоток и доступную для утилизации в различных органах и тканях, свидетельствует о том, что почки присуща важная функция, связанная с участием в энергетическом балансе организма.

Почка оказалась основным органом окислительного катаболизма инозитола. В ней миоинозитол окисляется в ксилулозу и затем через ряд стадий в глюкозу. В тканях почки синтезируется фосфатидилинозитол, являющийся необходимым компонентом плазматических мембран. Синтез глюкуроновой кислоты имеет большое значение для образования гликозаминогликанов, содержание которых высоко в межклеточной ткани внутреннего мозгового вещества почки и столь существенно для процесса осмотического разведения и концентрирования мочи.

Участие в обмене липидов связано с тем, что свободные жирные кислоты извлекаются почкой из крови и их окисление обеспечивает в значительной степени работу почки. Так как свободные жирные кислоты связаны в плазме с альбумином, то они не фильтруются, а их поступление в клетки нефрона происходит со стороны межклеточной жидкости. Эти соединения окисляются в большей степени в коре почки, чем в её мозговом веществе. В почке образуются триацилглицерины. Свободные жирные кислоты быстро включаются в фосфолипиды почки, играющие важную роль в выполнении различных транспортных процессов. Роль почки в липидном обмене состоит в том, что в её ткани свободные жирные кислоты включаются в состав триацилглицеринов и фосфолипидов и в виде этих соединений поступают в циркуляцию.

2.Экспериментальная часть.

2.1. Методы и материал исследования.


Исследования тканей почки проводились на половозрелых 7 месячных белых крысах генетической линии Вистар женского пола(2шт.) и мужского (1 шт.) (табл.1).
Табл.1 Материал исследования

№ п/п

Масса животного, г

Масса почки, г

1

234,0 ±9,8

1,05±0,08

2

249,7±9,8

0,76±0,08

3

214,9±9,8

0,70±0,08

Среднее значение

232,9

0,84



Метод 1. Определение глюкозы.

Глюкоза определялась редуктометрическим феррицианидным методом. Принцип метода состоит в следующем: белки ткани осаждаются гидроксидом кадмия. Глюкоза, содержащаяся в безбелковом фильтрате, окисляется в щелочной среде феррицианидом калия (красная кровяная соль), избыток которого определяется иодометрически. Образовавшийся ферроцианид калия связывается сернокислым цинком, который входит в состав “тройного раствора”[6].

Метод 2. Определение гликогена.

Стадия 1. Выделение гликогена. Принцип метода заключается в следующем: ткань подвергается десмолизу в 30%‑м гидроксиде калия (заменять на гидроксид натрия нельзя, так как при этом образуются плохо растворимые в спирте натриевые мыла и сода – это затрудняет последующую очистку осадка гликогена). Из десмолизата гликоген осаждается спиртом.

Стадия 2. Осаждённый гликоген подвергается гидролизу, и образовавшаяся глюкоза определяется редуктометрическим феррицианидным методом (метод 1) [6].

Метод 3. Совместное определение пирувата и лактата.

Стадия 1. Построение калибровочного графика для определения пирувата. Составляется ряд стандартных растворов пирувата (включая контроль – С=0). Строится график зависимости оптической плотности растворов от концентрации пирувата в растворах.

Стадия 2. Построение калибровочного графика для определения лактата. Составляется ряд стандартных растворов лактата (включая контроль – С=0). Строится график зависимости оптической плотности растворов от концентрации лактата в растворах.

Стадия 3. Определение количества пирувата в тканях почки колориметрическим методом с 2,4‑динитрофенилгидразином (по Умбрайту). Принцип метода состоит в том, что пируват взаимодействует в кислой среде с 2,4‑динитрофенилгидразином. Образующийся в результате реакции 2,4‑динитрофенилгидразид пировиноградной кислоты в отличие от гидразидов  других кетокислот хорошо растворим в толуоле, при помощи которого его экстрагируют из реакционной смеси и создают щелочную среду, в которой он приобретает коричнево‑красную окраску. Определение проводят колориметрически.

Стадия 4. Определение количества лактата в тканях почки методом с использованием п‑оксидифенила (по Баркеру и Саммерсону). Принцип метода. Молочная кислота кипячением с конц. серной кислотой превращается в ацетальдегид, который при конденсации с п‑оксидифенилом образует 1,1‑ди‑(оксидифенил)‑этан. Этот продукт конденсации в растворе серной кислоты окисляется в продукт фиолетового цвета. Серная кислота действует здесь как конденсирующий агент и окислитель. Интенсивность окраски пропорциональна количеству ацетальдегида, а, следовательно, и количеству лактата. Метод позволяет определять лактат в количествах от 0,03 до 0,2 мкмоль (2,7 – 18,0 мкг) в пробе.

    продолжение
--PAGE_BREAK--