Лекция: Метод выделения «лекарственных» ядов по Стасу-Отто

Выделения «лекарственных» ядовиз биологического мате­риала, основанный на изолировании этих веществ этиловым спиртом, подкисленным щавелевой кислотой, называется методом Стаса — Отто. В литературе описан ряд недостатков этого метода. В связи с этим первоначальный вариант метода не применяется в современном химико-токсико­логическом анализе, а применяется его отдельные модификаций. Одна из них приводится ниже.

100 г тщательно измельченного биологического материала вносят в широкогорлую колбу вместимостью 500 мл, зали­вают этиловым (96°) спиртом до покрытия им твердых частиц исследуемого объекта. Смесь биологического материала и этило­вого спирта подкисляют 10 %-м спиртовым раствором щавелевой кислоты. Содержимое колбы периодически перемешивают стек­лянной палочкой. Через некоторое время проверяют рН содержи­мого колбы и при необходимости прибавляют 10 %-й спиртовой раствор щавелевой кислоты до рН=2...3.

Колбу слегка закрывают пробкой, оставляют на сутки в теп­лом месте (25—30 °С) при периодическом перемешивании ее со­держимого. После этого кислую спиртовую вытяжку сливают с биологического материала. Настаивание биологического мате­риала с новыми порциями этилового спирта, подкисленного 10%-м раствором щавелевой кислоты до рН = 2...3, производят еще 3—4 раза (в течение суток каждый раз).В связи с тем что этиловый спирт подавляет диссоциацию щавелевой кислоты, для измерения рН содержимого колбы берут 5 капель жидкости, находящейся в колбе, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 5 ка­пель воды и определяют рН раствора универсальной индикаторной бумагой.

Кислые спиртовые вытяжки из биологического материала соединяют и переносят в фарфоровую чашку. Биологический ма­териал переносят на фильтр и промывают этиловым спиртом. Этиловый спирт, которым промывают биологический материал, присоединяют к полученным вытяжкам. Объединенные спирто­вые вытяжки упаривают до густоты сиропа на водяной бане, на­гретой до 40°С. К сиропообразной жидкости при перемешивании стеклянной палочкой по каплям прибавляют этиловый спирт (96%) до прекращения выпадения примесей в осадок. Образовав­шийся осадок отфильтровывают, фильтр промывают этиловым спиртом. Фильтрат снова упаривают на водяной бане до густоты сиропа, как указано выше. Из сиропообразного остатка примеси осаждают этиловым спиртом. Упаривание спиртовых фильтратов и осаждение примесей этиловым спиртом из сиропообразной жид­кости проводят многократно (до прекращения осаждения приме­сей от прибавления этилового спирта).

К очищенной таким образом сиропообразной жидкости при­бавляют 25 мл воды. Если при этом образуется осадок, его от­фильтровывают.

Кислую водно-спиртовую жидкость переносят в делительную воронку, прибавляют 10—15 мл хлороформа и легко взбалтывают в течение 5 мин, а затем отделяют хлороформную вытяжку. Кис­лую водно-спиртовую жидкость еще 2—3 раза взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 10—15 мл). Хлороформные вытяжки из кислой водно-спиртовой жидкости соединяют и иссле­дуют на наличие ядовитых соединений, экстрагирующихся орга­ническими растворителями из кислой среды (барбитураты, слабые основания и др.).

Оставшуюся в делительной воронке кислую жидкость подще­лачивают 25 %-м раствором аммиака до рН = 9...10. Из этой под­щелоченной жидкости алкалоиды и другие токсические вещества 3—4 раза экстрагируют новыми порциями хлороформа (по 10— 15 мл). Хлороформные вытяжки соединяют и исследуют на нали­чие алкалоидов и некоторых других токсических веществ основ­ного характера (алкалоиды и синтетические азотистые лекарственные средства).

Описанный выше метод выделения токсических веществ из биологического материала, основанный на изолировании их эти­ловым спиртом, подкисленным щавелевой кислотой, является трудоемким. Для выделения токсических веществ из биологиче­ского материала с помощью этого метода требуется 8—10 рабо­чих дней. На один анализ расходуется около 500 мл этилового спирта. В связи с большим количеством операций, связанных с осаждением примесей из вытяжек, в ходе химико-токсикологи­ческого анализа могут теряться определенные количества ядо­витых веществ, адсорбирующихся примесями.

Несмотря на указанные выше недостатки метода изолирова­ния токсических веществ подкисленным этиловым спиртом, этот метод является эффективным для выделения ядовитых соедине­ний из гнилостного биологического материала.

7.2.7. Метод выделения фенотиазинов из биологических объектов по Е.М.Саломатину.

Экстракция подкисленным спиртом из биологического материала подробно изучен Е.М. Саломатиным при определении производных фенотиазина в биологических объек­тах. Обладая слабыми основными свойствами, производные фенотиазина при рН ≈ 2-3 об­разуют ионизированную форму, а при рН >7 – неионизированную, которая используется для выделения фенотиазинов из биологического материала в гидрофильную среду (первый случай), и для отделения и исследования фенотиазинов из гидрофильной среды органическим растворителем (второй случай).

Производные фенотиазина представляют собой белые (или со слабым желтоватым, сероватым, кремовым оттенком) кристаллические веще­ства. Они легко окисляются (даже кислородом воздуха) и темнеют. Соли производных фенотиазина хорошо растворимы в воде, этаноле, практически нерастворимы в диэтиловом эфире. Основания представляют собой сиропообразную массу, которая плохо рас­творима в воде, но хорошо — в этаноле, хлороформе, диэтиловом эфире, этилацетате. Производные фенотиазина — вещества основного характера, который обусловлен нали­чием в структуре молекулы гетероциклического атома азота и третичного атома азота в алифатическом радикале.

В качестве биологического материала могут быть представлены: желудок с содержимым, мозг, почка, печень с желчным пузырем, кровь и моча.

Схема метода: 1 -й этап. Объект заливают 96% этиловым спиртом, подкисляют

2-й этап. Фильтрат экстрагируют дважды диэтиловым эфиром при рН 2-3. Затем водную фазу подщелачивают 50% раствором гидроксида натрия и вновь экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные эфирные вытяжки взбалтывают с 0,5 М раствором серной кислоты и полученный кислый водный реэкстракт используют для обнаружения производных фенотиазина.

Оценка метода. По данным автора, метод позволяет достичь максимальной экстракции при изолировании и уменьшить потери исследуемых веществ как при изолировании, так и при экстракции.

7.2.8 Методы выделения токсических веществ из биологического материала, изолируемых подкисленной водой на современном этапе