Лекция: Обнаружение кофеина

Для обнаружения кофеина используется хлороформная вытяжка из кислых водных растворов.

1 Кофеин дает положительную мурексидную реакцию.

2 Кофеин дает осадки с реактивами Драгендорфа, Зонненштейна, Шейблера и др.

3. При нагревании (на кипящей водяной бане) раствора кофеина с реактивом Несслера в течение 1-2 мин появляется красно-бурый осадок. Теобромин в этих условиях дает только слабо-коричневуто окраску.

4.Обнаружение кофеина по УФ- и ИК- спектрам. Раствор кофеина в этиловом спирте, имеет максимум поглощения при длине волны, рав­ной 273 нм. В 0,1 н. растворе хлороводородной кислоты кофеин имеет максимум поглощения при длине волны, равной 272 нм (теофиллин — 270 нм ). В ПК-области спектра основание кофеина (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1695, 1658 и745см -1.

5. Обнаружение кофеина методом хроматографии. На хроматографическую пластинку (12x18 см), покрытой тонким слоем силикагеля, наносят каплю исследуемого раствора, а рядом — каплю раствора «сви­детеля» (0,01% раствор кофеина в хлороформе). Хроматографируют в системе:эфир ацетон — 25%-й раствор аммиака (40:20:1).

Проявляют 0,1 н. раствором йода, а затем через несколько минут пластинку опрыскивают смесью равных объемов 96% этилового спир­ит и 25 % раствора хлороводородной кислоты. При этом пятна кофеина на хро­матограммах приобретают фиолетовую окраску

6 .Мурексидная реакция.

Выполнение реакции. 5-6 капель раствора исследуемого вещества в хлороформе вносят в фарфоровую чашку и при комнатной температуре выпаривают досу­ха. К сухому остатку прибавляют 0,5-1,0 мл бромной воды (насыщенный раствор брома в воде), 2-3 капли хлороводородной кислоты, затем содержимое фарфоровой чашки на водяной бане выпаривают досуха. К полученному остатку, имеющему красную или красно-бурую окраску, прибавляют каплю 25% раствора аммиака. Появление пурпурной или фиолетовой окраски указывает на наличие производных ксантина в растворе.

7 .Реакпия группового осаждения алкалоидов

Кофеин, как азотистое основание взаимодействует со многими обще алкалоидными осадительными реактивами, образуя осадки. Некоторые реакции, например, с реактивами Драгендорфа. Зонненшейна, Шеиблера и др. является характерными.

Выполнение реакции. На предметное стекло наслаивают 2-3 капли исследуемого хлороформного раствора, хлороформ испаряют при комнатной температуру, остаток растворяют в одной капле 0,1 н. раствора хлороводородной кислоты наносят каплю вышеназванных реактивов. Предметное стекло помещают во влажную камеру и через
10-15 (иногда через 30) минут под микроскопом наблюдают характерные для каждого алкалоида кристаллы или сростки из них.

Механизм реакции осаждения заключается в том, что происходит
взаимодействие осадительных реактивов, являющихся кислотами
и алкалоидов, являющихся основаниями.

8. Реакция с хлоридом ртути (11).

На предметное стекло наносят немного исследуемого хлороформного раствора, который выпаривают досуха На сухой остаток наносят 0,1 н. раствор хлороводородной кислоты и каплю 5%-го раствора хлорида ртути (II). Через 10-15 минут образуются крупные, шелковистые, бесцветные иглообразные кристаллы.

9. Реакция отличия кофеина от теобромина.

При нагревании (на кипящей водяной бане) раствора кофеина с реактивом Несслера в течение 1-2 мин. Появляется красно-бурый осадок. Теобромин в этих условиях дает только слабо-коричневую окраску.

10. Обнаружение методом хроматографии (ТСХ): (Условие выполнения см. обнаружение кофеина).

Значение Rf: 0,22±0,02 (теофиллин), 0,47±0,01 (теобромин), 0.62± 0,01
(кофеин).