Лекция: Новые направления производства химико-токсикологических исследований на группу веществ, изолируемых экстракцией с полярными растворителями.

Начиная с конца 1960 г. появилось много работ, указывающих на возможность использования в химико-токсикологических исследованиях небольшой по своей массе биологический материал.

Этому способствовало то, что используемые инструментальные методы анализа обладают высокой чувствительностью, а также, в некоторых случаях, производится направленный анализ или же эксперт ори­ентирован на содержание яда в организме.

Как правило, в таких случаях, обстоятельствах для экстракции токсического вещества рекомендовано следующее количество биоматериала:

1. Концентрация анализируемого вещества около 0,1 мг % — 50 мл мочи иликрови, 50 г ткани.

2. Концентрация ядов — около 1 мг % — 3 мл мочи (крови) или 5 г ткани.

3. Концентрация токсического вещества 10 мг % — 1 мл мочи (кро­ви) или 1 г ткани.

Эти количества достаточны при экстракционном методе с 50% эф­фективностью при чувствительности аналитической методике около 5 мкг.

При анализе неизвестного яда в практике судебно-химических эк­спертиз принято брать для анализа 100 мл мочи (крови) или 50 г био­логической ткани.

Первые опыты в этом направлении были сделаны на кафедре I ММИ им. И М Сеченова (зав кафедрой Б.Н.Изотов). Сейчас име­ются много таких работ. Например, в Алтайском Государственном медицинском институте на кафедре токсикологической химии В. А.Карташовым и его сотрудниками модифицированы и разработаны, а также внедряются в практику химико-токсикологической экспертизы работы с малой навеской, которые приводим ниже:

7.2.17. Модифицированный метод А.А. Васильевой.

К 5 г измельченной ткани печени или почки в пенициллиновом флаконе вместимостью 20 мл прибавляют 10 мл 10 % раствора щавелевой кислоты, тщательно перемешивают, измеряют рН, который должен быть равен 1.0...2,0 при необходимости добавляют насыщенный раствор щавелевой кислоты. Пробу оставляют при комнатной температуре на 1 час, при периодическом встряхивании флакона через 5-10 минут, или пробу помещают в аппарат для встряхивания. Через 1 час центрифуги­руют при 2,5 тыс. об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость (рН≈1,0...2,0) осторожно сливают в другой пенициллиновый флакон, куда добавляют 10 мл эфира, закрывают пробкой, энергично встряхивают в течение 2 минут и центрифугируют в вышеописанных условиях. Эфир­ное извлечение отделяют от водной фазы, фильтруют через складча­тый фильтр в фарфоровую чашку и выпаривают эфир при комнатной температуре досуха. Водную фазу после извлечения эфиром подщелачивают 25% раствором аммония гидроксида до рН≈10,0, добавляют 10 мл хлороформа и экстрагируют также, как эфиром. Хлороформный экстракт отделяют центрифугированием, фильтруют в фарфоровую чашку, хлороформ выпаривают при температуре не выше 40°С.

7.2.18. Модифицированный метод Стасса — Отто

К 5 г измельченной ткани печени или почки в пенициллиновом флаконе вместимостью 20 мл прибавляют 8 мл спирта и 2 мл 10% спиртового раствора щавелевой кислоты (рН≈2,0...3,0). Содержимое флакона перемешивают, контролируют значение рН (1,0...2,0), встряхивают ицентрифугируют. Экстракты сливают и операцию извлечения повторяют дважды. Спиртовые извлечения объединяют, выпаривают на водяной бане при 60°С до густоты сиропа и проводят осаждение белков абсолютным этанолом 2 раза. После выпаривания спиртовых извлечений к остаткам прибавляют 5 мл теплой воды, встряхивают и центрифугируют. Водное извлечение сливают (рН≈2,0...3,0) и дважды экстрагируют эфиром, используя каждый раз по 10 мл. Эфирные экстракты отделяют и выпаривают досуха. Сухой остаток в фарфоровой чашке тщательно обрабатывают горя­чей модой (80-90°С) 2 раза по 5 мл, фильтруя каждую порцию через ватный тампон в пенициллиновый флакон. После охлаждения к жидкостидобавляют насыщенный раствор щавелевой кислоты до рН≈1,0...2,0 и экстрагируют 10 мл эфира. Эфирное извлечение отделяют и фильтруют через складчатый фильтр в пенициллиновый флакон с надписью «экстракт из кислого раствора».

Водную фазу подщелачивают 25% раствором аммония гидроксида (рН≈9,0… 10,0) и проводят экстракцию последовательно 10 мл эфира, а затем 10 мл хлороформа. Органическую фазу в этом и другом случаях отделяют, объединяют, выпаривают досуха. Сухой остаток фарфоровой чашки тщательно обрабатывают 0,1 н. раствором хлороводородной кислоты 3 раза по 5 мл, фильтруя каждую порцию через ватный тампон во флакон. К жидкости добавляют 25% раствор аммония гидроксида до рН≈10,0 и экстрагируют 10 мл хлороформа. Хло­роформный экстракт отделяют и фильтруют через складчатый фильтр в пенициллиновый флакон с надписью «экстракт из щелочного раствора».