Реферат: Рецепторов, взаимодействующих в рамках регулируемого протеолитического каскада, разрушающего проникающие бактерии и предотвращающего осаждение иммуннокомплексов

Complement C3c FS*

Комплемент C3c


Информация для заказа

Кат. № Фасовка

1 1802 99 10 935 R1 220 мл + R2 18 мл

Справка

Система комплемента включает в себя не менее 20 белков плазмы крови и несколько белков-рецепторов, взаимодействующих в рамках регулируемого протеолитического каскада, разрушающего проникающие бактерии и предотвращающего осаждение иммуннокомплексов. Активация приводит к понижению концентраций C3 и/или C4 по причине расходования интактных белков. Каскад комплемента может быть активирован двумя различными путями. Классический путь активируется иммунокомплексами или антителами, связанными с бактериями или вирусами. Каскад начинается со связывания C1q-субъединицы C1 с Fc-фрагментом антител, что активирует C3 через протеолиз C4. Альтернативный путь активируется, независимо от участия антител, микроорганизмами, полисахаридами, автолизом C3 или агрегированными иммуноглобулинами и не требует белка C4.

Поскольку участие C3 является общим для обоих путей, понижение его концентрации указывает на общую активацию комплемента. Пониженные значения C3 наблюдаются при воспалительных и инфекционных заболеваниях, особенно при гломерулонефрите и системной красной волчанке (СКВ). Значения C4 при этом могут быть пониженными или нормальными в зависимости от пути активации. Низкие значения только C4 могут встречаться при наследственных или приобретённых ангионевротических отёках. Описаны случаи врождённой недостаточности обоих факторов комплемента.

Как C3, так и C4 проявляют свойства «белков острой фазы». Повы­шение их концентрации, вызванное воспалительным процессом, может замаскировать обычное повышение потребления компле­мента.

^ Метод

Иммунотурбидиметрический тест.

Принцип определения

Определение концентрации C3c по конечной точке путем фотометрического измерения реакции антиген–антитело между антителами к человеческому C3c и C3c, присутствующим в образце.

Реагенты

Компоненты и концентрации в реакционной смеси

Примечание: Концентрации приведены для окончательной тестовой смеси

R1:

Трис-буфер, ммоль/л

pH 7,5

100




NaCl, ммоль/л




320




Полиэтиленгликоль (ПЭГ)







Детергенты, стабилизаторы




R2:

Трис-буфер, ммоль/л

рН 8,0

100




NaCl, ммоль/л




320




Козьи антитела к человеческому С3с со стабилизаторыми




Стабильность и хранение

Реактивы стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности при хранении при 2–8°C. Не допускать загрязнения. Не замораживать реактивы!

Меры предосторожности

1. Реагенты содержат азид натрия (0,95 г/л) в качестве консерванта. Не допускать их попадания внутрь, а также на кожу и слизистые оболочки!

2. Следовать мерам предосторожности, предусмотренным при ис­пользовании лабораторных реактивов.

Обезвреживание отходов

В соответствии с местными правилами.

Подготовка реагентов

Реагенты готовы к использованию.

Необходимые материалы, не включенные в набор

• 0,9% раствор NaCl.

• Стандартное лабораторное оборудование.

^ Исследуемые образцы

• Сыворотка.

• Гепаринизированная или ЭДТА-плазма.

При хранении сыворотки белки C3 и C4 медленно фрагментируются до компонентов C3c и C4c, соответственно (фрагментация ингибируется ЭДТА). Эти фрагменты продолжают содержать реакционноспособные эпитопы и могут дать даже более сильную реакцию, чем интактные белки. В результате, свежие пробы сыворотки могут показать более низкие результаты для С3 (разница до 30%), чем пробы, хранившиеся 8 суток при 2–8°C. Фрагментация C4 происходит значительно более медленно, чем C3, и при таких же условиях хранения эта разница может достигать 15%.

Загрязнённые образцы хранению не подлежат.

^ Процедура определения

Адаптации к автоматическим системам запрашивайте дополнительно

Длина волны, нм 340

Длина опт. пути, см 1

Температура, °С 37

Измерение относительно холостой пробы




^ Холостая проба

Образец/ калибратор

Образец/калибратор, мкл

–

5

^ Дистил. вода, мкл

5

–

Реагент 1, мкл

350

350

Перемешать, инкубировать 3-5 мин, измерить оптическую плотность (А1), затем добавить:

Реагент 2, мкл

70

70

Перемешать, инкубировать 5 мин, измерить оптическую плотность (А2).

A = [(A2 – A1)образца/калибратора] – [(A2 – A1)хол.пробы]

Расчет

Концентрации C3c в анализируемых пробах оп­ределяются по калибровочной кривой с исполь­зованием соответствующих математических моделей, таких как logit/log или сплайн-аппроксимация. Калибровочная кривая строится путём измерения 5 калибраторов различных уровней и изотонического раствора NaCl (0,9%) для определения нулевого значения.

^ Стабильность калибровки: 4 недели.



Калибраторы и контроли

Для калибровки автоматических фотометрических систем рекомендуется использовать набор калибраторов TruCal Protein или калибратор TruCal Protein high компании DiaSys. Значения калибраторов установлены по эталонному препарату IFCC/BCR/CAP для 14 белков плазмы (CRM 470). Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольной сыворотки DiaSys TruLab Protein.

Кат. № Фасовка

TruLab Protein

уровень 1 5 9500 99 10 046 11 мл

уровень 2 5 9510 99 10 046 11 мл

^ Рабочие характеристики

Диапазон измерений

Тест был разработан для определения концентраций C3c в пределах 1–500 мг/дл (0,01–5 г/л), в зависимости от концентрации калибратора с наиболее высоким значением. Если значение превосходит верхний предел, необходимо развести образец изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1+1 и полученный результат умножить на 2.

Предел прозоны

При концентрациях C3c до 1000 мг/дл (10 г/л) эффект прозоны не наблюдался.

Специфичность/Помехоустойчивость

Complement C3c FS DiaSys является чувствительным иммунологическим тестом благодаря наличию специфических антител к человеческому С3с-компоненту комплемента. Связанный и несвязанный билирубин до 60 мг/дл, гемоглобин 1000 мг/дл, липемия до 2000 мг/дл триглицеридов и ревматоидный фактор (RF) до 1200 МЕ/мл не влияют на точность анализа.

Не наблюдалось также интерференции при моноклональной гаммопатии с концентрацией IgA до 6400 мг/дл, IgM до 4100 мг/дл и IgG до 6400 мг/дл.

Чувствительность/Предел определения

Нижний предел определения составляет 1 мг/дл (0,01 г/л).

Воспроизводимость

(число измерений n = 20)

Образец

Среднеарифметическое значение, мг/дл

SD, мг/дл

CV, %

Внутрисерийная

Образец 1

143

3,00

2,10

Образец 2

188

5,84

3,10

Образец 3

220

7,73

3,51

Межсерийная

Образец 1

143

5,70

4,00

Образец 2

186

6,58

3,54

Образец 3

219

6,93

3,16

Общая воспроизводимость в соответствии с протоколом EP-5 Национального комитета клинических лабораторных стандартов США (NCCLS)

(число измерений n = 40)

Образец

Среднеарифметическое значение, мг/дл

SD, мг/дл

CV, %

Образец 1

142

4,23

2,97

Образец 2

185

9,18

4,95

Сравнение методов

Сравнение реагента Complement C3c FS DiaSys (y) и иммунотурбидиметрических тестов (x) с использованием 107 образцов дало следующие результаты:

y = 0,83x + 6,72 мг/дл; r = 0,982.

Сравнение реагента Complement C3c FS DiaSys (y) и нефелометрических тестов (x) с использованием 95 образцов дало следующие результаты:

y = 1,11x – 7,02 мг/дл; r = 0,961.

^ Референсные значения [3]

90–180 мг/дл (0,9–1,8 г/л).

При тестировании свежих образцов пределы нормального диапазона для C3c ниже.

Каждая лаборатория должна проверить применим ли контрольный диапазон величин к местному населению, и определить, при необходимости, свой собственный диапазон нормальных величин.

Литература

1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. pp. 794–806.

2. Johnson AM, Rohlfs EM, Silverman LM. Proteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. pp. 507–512.

3. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J et al. Consensus of a group of professional societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the standardization against the IFCC/BCR/CAP reference material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996; 34: 517–520.

4. Okumura N, Nomura M, Tada T et al. Effects of sample storage on serum C3c assay by nephelometry. Clin Lab Sci 1990; 3(1): 54-57.

Изготовитель

DiaSys Diagnostic Systems GmbH

Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany




*FS – жидкие стабильные (Fluid stable)